『壹』 用T4DNA連接酶連接時間過長會怎麼樣4度連接了大概17個小時。
咨詢記錄 · 回答於2021-08-05
『貳』 質粒和基因連接時間過長會怎麼樣我都連了三天了~
可能自連的情況概率有點高的,你的載體有篩選標記么,有的話,照樣做轉化,然後要記得pcr檢測或酶切檢測陽性克隆.
如果你是放4℃冰箱放了三天,關系應該不大；TA克隆的話,說不定效果更好.
『叄』 人類DNA會隨時間而改變嗎
人類個體生下來基因就已經確定了，但是基因的表達卻一直在變動，部分體細胞的變異還會成為惡性的癌細胞；人類群體DNA庫更是在不斷地變化，是人類進化的動力。
DNA是細胞最關鍵的物質，控制著細胞的所有行為，包括細胞的增殖，而且DNA要發揮作用需要結合一些化學基團，與基因有關的化學修飾被成為表觀遺傳，這個伴隨著人的一生都在改變。人體的多數細胞都會不斷地死亡，所以細胞需要分裂增殖，而增殖必須有DNA的復制。
綜上，不管題主問的是人類個體還是人類群體，DNA是會改變的，不過DNA改變的只是鹼基序列、表觀遺傳等，構成DNA的物質還是完全相同的，就是脫氧核糖和4種鹼基以及一些蛋白質，進化不能使生物脫離原有的生物模式。
『肆』 DNA的復制時間與理論上不同,這是為什麼
你原來的復制時間和理論上是有一定的區別主要是因為DNA的復制是多起點而且復制的是多個位點同時進行，所以這個是沒有辦法判斷什麼時候開始。
『伍』 用T4DNA連接酶連接時間過長會怎麼樣4度連接了大概17個小時。
摘要 沒影響的，T4DNA連接酶的最佳反應溫度是16℃，一般4℃可以過夜的
『陸』 表達載體的構建中目的片段與表達載體的連接最好是幾個小時時間長一點有什麼影響么
最好是12h左右，按說應該是時間越長越好，會有更多的DNA連接，但考慮到DNA的穩定性，還是12h左右較好
『柒』 dna連接反應的影響因素有哪些
1、 連接緩沖液的影響：大體上緩沖液含有以下組分：20-100mmol/L的Tris-HCl，較多用50mmol/L，pH的范圍在7.4-7.8，較多 用7.8，目的是提供合適酸鹼度的連接體系；10mmol/L的MgCl2，作用是激活酶反應；1-20mmol/L的DTT，較多用10mmol/L， 作用是維持還原性環境，穩定酶活性，25-50ug/ml的BSA，作用是增加蛋白質的濃度，防止因蛋白濃度過稀而造成酶的失活。與限制酶緩沖液不同的是 連接酶緩沖液還含有0.5-4mmol/L的ATP，現多用1mmol/L，是酶反應所必需的。
2、 pH的影響：一般將緩沖液的pH調節到7.4-7.8，較多用7.8。有實驗表明，若把pH為7.5-8.0時的酶活力定為100%，那麼體系偏鹼（pH為8.3）時僅為全部活力的65%；當體系偏酸（PH為6.9）時僅為全部活力的40%。
3、 ATP濃度的影響：連接緩沖液中ATP的濃度在0.5-4mmol/L之間，較多用1mmol/L。研究發現，ATP的最適濃度為0.5-1mmol /L，過濃會抑制反應。例如，5mmol/L的ATP會完全抑制平末端連接，黏端的連接也有10%被抑制；還有報道，當ATP的濃度為0.1mmol/L 時，去磷酸載體的自環比例最大。由於ATP極易分解，所以當連接反應失敗時，除了DNA與酶的問題外，還應考慮ATP的因素。含有ATP的緩沖液應於 -20℃保存，溶化取用後立即放回。連接緩沖液體積較大時最好分小管貯存，防止反復凍融引起ATP分解。與限制酶緩沖液不同的是，含ATP的連接緩沖液長 期放置後往往失效，所以也可自行配製不含ATP的緩沖液（可長期保存），臨用時加入新配製的ATP母液。
4、 連接溫度與時間的影響：因為黏性末端的DNA雙鏈間有氫鍵的作用，所以溫度過高會使氫鍵不穩定，但連接酶的最適溫度又恰為37℃。為了解決這一矛盾，在經 過綜合考慮後，傳統上將連接溫度定為16℃，時間為4-16h。現經實驗發現，對於一般的黏性末端來說，20℃ 30min就足以取得相當好的連接效果，當然如果時間充裕的話，20℃ 60min能使連接反應進行得更完全一些。對於平末端是不用考慮氫鍵問題的，可使用較高的溫度，使酶活力得到更好的發揮。
5、 酶濃度的影響：日常使用的DNA濃度比酶單位定義狀態低10-20倍，連接平末端時酶用量要比連接黏端大10-100倍。進行黏末端連接時需先行稀釋，稀釋液的成分與酶保存緩沖液相同或類似，稀釋液中的酶能在長時間保持活力，也便於隨時取用。
6、 DNA濃度的影響：要求得到環化的有效連接產物， DNA濃度不可過高，一般不會超過20nmol/L。要求線性化的連接產物， DNA的濃度可以高些，至少是接近推薦的濃度。在用大質粒載體進行大片段克隆時，以及在雙酶切片段的連接反應中，DNA濃度還應降低，甚至是DNA的總濃 度低至幾個nmol/L。另據研究，T4 DNA連接酶對DNA末端的表觀Km值為1.5nmol/L，所以，連接時DNA濃度不應低於1nmol/L。即應具有2nmol/L的末端濃度。
『捌』 T4DNA連接酶到底反應多長時間最佳
這個沒有實驗證明過，只知道DNA連接酶在高溫不穩定，所以一般都用16℃連接過夜。25℃左右的室溫估計會維持七八個小時。
『玖』 用T4DNA連接酶連接時間過長會怎麼樣4度連接了大概17個小時。克隆基因序列需要和原來CDS序列
摘要 沒有影響
『拾』 dna連接的疑惑
不會的。DNA是半不連續復制。
半不連續復制是由於DNA雙螺旋的兩股單鏈是反向平行，一條鏈的走向為5'-3',另一條鏈為3'-5',DNA的兩條鏈都能作為模板以邊解鏈邊復制方式，同時合成兩條新的互補鏈。但是，所有已知DNA聚合酶的合成方向都是5』-3』，所以在復制是，一條鏈的合成方向和復制叉前進方向相同，可以連續復制，稱為領頭鏈；另一條鏈的合成方向與復制叉前進方向相反，不能順著解鏈方向連續復制，必須待模板鏈解開至足夠長度，然後從5『-3』生成引物並復制子鏈。延長過程中，又要等待下一段有足夠長度的模板，再次生成引物而延長，然後連接起來，這條鏈稱隨從鏈。因此就把領頭鏈連續復制，隨從鏈不連續復制的復制方式稱為半不連續復制。
http://ggene.cn/html/video/2009/0418/207.html
有個動畫，可以幫助你理解。