❶ 酶切的時間長一點對基因是否有影響嗎
採用規PCR擴增目基
PCR技術基本原理：該技術模板DNA、引物四種脫氧核糖核苷酸存,依賴於DNA聚合酶酶促合反應.DNA聚合酶單鏈DNA模板,藉助段雙鏈DNA啟合,通或兩工合寡核苷酸引物與單鏈DNA模板段互補序列結合,形部雙鏈.適宜溫度環境,DNA聚合酶脫氧單核苷酸加引物3′-OH末端,並起始點,沿模板5′→3′向延伸,合條新DNA互補鏈.
❷ 雙酶 基因多少時間37度，或者說酶切時間過長還能用嗎，比如轉化什麼的
看你DNA量多少，酶量多少，DNA是否干凈。一般算好量，盡量把酶切時間控制在1-4小時之內，時間過長容易出現星號活性，或者連接效率降低等。
❸ 質粒和基因連接時間過長會怎麼樣我都連了三天了~~
可能自連的情況概率有點高的，你的載體有篩選標記么，有的話，照樣做轉化，然後要記得pcr檢測或酶切檢測陽性克隆。
如果你是放4℃冰箱放了三天，關系應該不大；TA克隆的話，說不定效果更好。
❹ 限制酶酶切過久會咋樣
會出現非特異性剪切，跑膠的話會出現彌散或者是大於兩條的條帶，非特異性程度和內切酶的活性正相關。
❺ 酶切後加熱滅活時間長了會怎麼樣70度30分
沒有太大影響
EP管的蓋子蓋緊封嚴，經常會出現水分丟失嚴重的問題，尤其是在小體系酶切後金屬浴滅活時，滅活後發現EP管里幹了，如果是水分蒸發後凝結在管壁上倒好說，輕甩下就哦了
❻ 在整個酶切反應過程中應注意哪些問題
1) 成功酶切的關鍵是准備好模板DNA。DNA樣品中不能含有有機溶劑（會使酶變性或產生星號 貨性），不能含有干擾酶活性的污染物質，不能含有高濃度的EDTA (TE中的EDTA濃度較低，對Mg的濃度影響較小)；同時要對DNA甲基化程度及其對酶切效率的影響要做到心中有數。
2) 選用合適的酶。根據酶切序列選用，特別注意選用甲基化對酶活性的干擾。
3) 正確使用和保存酶。酶需要保存在-20度的低溫環境中，只是在需要用酶才從冰箱中取出來。 運輸和臨時存放時需要將酶至於冰上。手拿酶管時不要接觸酶管下步含酶的部分，移酶時盡可能用長TIP, 避免污染。用完後需要及時送回原處。注意：酶通常是最後加。所有
4) 反應體積需要根據實驗目的定，常規的酶切一般要維持在10-50ul，酶切鑒定 10-20ul就可以了。
5) 模板濃度問題：濃度過高，溶液黏度過大，酶不能有效擴散，酶切效果不會好。濃度過低，也會 影響酶活性。
6)注意模板用量和反應體積的關系。對酶用量，模板用量，反應體積等要素的確定需要的是時間和 經驗的積累。
7) 酶切反應的各個組分加完後，需要用TIP小心混勻幾次，short spin 一下就可以保溫了。一般不能使用振盪器混勻。
8) 反應溫度的選擇。一般反應都用37度，但是 Sma I 的最適合溫度是25度，37度時酶仍表現出活性，但是效率下降50%。部分從耐熱菌制備的酶需要在37度以上的溫度反應，如Taq I的最適溫度為65度，37度保溫，效率僅為前者的1/10。
9) 反應時間的選擇。一般酶切鑒定30分鍾就可以了。要完全酶切可以採用少量的酶長時間反應， 或較高的酶量短時間處理都可以達到。在使用高酶量的時候需要注意甘油的最終濃度不要超過5%，也就是說10ul的體系，酶的用量不要超過1ul。
10) 是否和如何終止反應？酶切鑒定之類的實驗不需要特殊處理。滅活的手段：加入高濃度的 EDTA；65度或80度熱處理20-30分鍾；部分從高溫菌純化出來的內切酶由於最適的反應溫度比較高，熱處 理滅活不一定完全，需要用苯酚/氯仿/乙醇方法純化；電泳回收也是實驗室常用除酶的手段。
❼ 請問酶切時間過長是不是會導致DNA降解
通常,overdigest will cause smear, but it cannot cause DNA disappear. The possibility of enzyme contamination is not very high.jinquan82(站內聯系TA)我在酶切質粒的時候也遇到過幾次這種情況，最後重提的質粒酶切就出來了，初步分析是提取質粒過程中引入DNA酶，使質粒降解guodongsheng200(站內聯系TA)可能降解,我也遇到過:P:P:P:P:P:P:P:Pejacky(站內聯系TA)可能是你的內切酶引入了外切酶，污染了
❽ 為什麼酶切時間過長會造成星號活力
星號活力：指某些限制性內切酶在特定條件下，如PH高，反應液離子濃度過低時，會使酶的特異性發生改變，導致酶的切割位點專一性發生變化並產生許多不需要的序列。
這個是星號活性的定義，看論壇有人用商品酶單酶切酶切過夜後，會得到多條條帶，應該就是酶自身亂切了。酶切是需要Mg2+和APT的，時間過長的酶切應該是Mg2+濃度降低導致的酶的特異性發生變化，而導致條帶不正常吧。
純屬個人觀點，我從網路上也沒找到答案。
❾ 20微升體系做酶切時，如果酶量過多會對結果造成什麼影響
通常酶保存在50%甘油裡面，如果加入酶量過多，會抑制酶的活性，通常加入酶量小於整個體系的...10%
❿ 單酶切時間長有壞處嗎
如果酶沒有星活性的話，單切時間長一些沒什麼問題。但是如果該酶有星活性的話，一定不能切的時間過長。