1. 质粒和基因连接时间过长会怎么样我都连了三天了~
可能自连的情况概率有点高的,你的载体有筛选标记么,有的话,照样做转化,然后要记得pcr检测或酶切检测阳性克隆.
如果你是放4℃冰箱放了三天,关系应该不大；TA克隆的话,说不定效果更好.
2. 表达载体的构建中目的片段与表达载体的连接最好是几个小时时间长一点有什么影响么
最好是12h左右，按说应该是时间越长越好，会有更多的DNA连接，但考虑到DNA的稳定性，还是12h左右较好
3. dna连接反应的影响因素有哪些
1、 连接缓冲液的影响：大体上缓冲液含有以下组分：20-100mmol/L的Tris-HCl，较多用50mmol/L，pH的范围在7.4-7.8，较多 用7.8，目的是提供合适酸碱度的连接体系；10mmol/L的MgCl2，作用是激活酶反应；1-20mmol/L的DTT，较多用10mmol/L， 作用是维持还原性环境，稳定酶活性，25-50ug/ml的BSA，作用是增加蛋白质的浓度，防止因蛋白浓度过稀而造成酶的失活。与限制酶缓冲液不同的是 连接酶缓冲液还含有0.5-4mmol/L的ATP，现多用1mmol/L，是酶反应所必需的。
2、 pH的影响：一般将缓冲液的pH调节到7.4-7.8，较多用7.8。有实验表明，若把pH为7.5-8.0时的酶活力定为100%，那么体系偏碱（pH为8.3）时仅为全部活力的65%；当体系偏酸（PH为6.9）时仅为全部活力的40%。
3、 ATP浓度的影响：连接缓冲液中ATP的浓度在0.5-4mmol/L之间，较多用1mmol/L。研究发现，ATP的最适浓度为0.5-1mmol /L，过浓会抑制反应。例如，5mmol/L的ATP会完全抑制平末端连接，黏端的连接也有10%被抑制；还有报道，当ATP的浓度为0.1mmol/L 时，去磷酸载体的自环比例最大。由于ATP极易分解，所以当连接反应失败时，除了DNA与酶的问题外，还应考虑ATP的因素。含有ATP的缓冲液应于 -20℃保存，溶化取用后立即放回。连接缓冲液体积较大时最好分小管贮存，防止反复冻融引起ATP分解。与限制酶缓冲液不同的是，含ATP的连接缓冲液长 期放置后往往失效，所以也可自行配制不含ATP的缓冲液（可长期保存），临用时加入新配制的ATP母液。
4、 连接温度与时间的影响：因为黏性末端的DNA双链间有氢键的作用，所以温度过高会使氢键不稳定，但连接酶的最适温度又恰为37℃。为了解决这一矛盾，在经 过综合考虑后，传统上将连接温度定为16℃，时间为4-16h。现经实验发现，对于一般的黏性末端来说，20℃ 30min就足以取得相当好的连接效果，当然如果时间充裕的话，20℃ 60min能使连接反应进行得更完全一些。对于平末端是不用考虑氢键问题的，可使用较高的温度，使酶活力得到更好的发挥。
5、 酶浓度的影响：日常使用的DNA浓度比酶单位定义状态低10-20倍，连接平末端时酶用量要比连接黏端大10-100倍。进行黏末端连接时需先行稀释，稀释液的成分与酶保存缓冲液相同或类似，稀释液中的酶能在长时间保持活力，也便于随时取用。
6、 DNA浓度的影响：要求得到环化的有效连接产物， DNA浓度不可过高，一般不会超过20nmol/L。要求线性化的连接产物， DNA的浓度可以高些，至少是接近推荐的浓度。在用大质粒载体进行大片段克隆时，以及在双酶切片段的连接反应中，DNA浓度还应降低，甚至是DNA的总浓 度低至几个nmol/L。另据研究，T4 DNA连接酶对DNA末端的表观Km值为1.5nmol/L，所以，连接时DNA浓度不应低于1nmol/L。即应具有2nmol/L的末端浓度。
4. 人类DNA会随时间而改变吗
人类个体生下来基因就已经确定了，但是基因的表达却一直在变动，部分体细胞的变异还会成为恶性的癌细胞；人类群体DNA库更是在不断地变化，是人类进化的动力。
DNA是细胞最关键的物质，控制着细胞的所有行为，包括细胞的增殖，而且DNA要发挥作用需要结合一些化学基团，与基因有关的化学修饰被成为表观遗传，这个伴随着人的一生都在改变。人体的多数细胞都会不断地死亡，所以细胞需要分裂增殖，而增殖必须有DNA的复制。
综上，不管题主问的是人类个体还是人类群体，DNA是会改变的，不过DNA改变的只是碱基序列、表观遗传等，构成DNA的物质还是完全相同的，就是脱氧核糖和4种碱基以及一些蛋白质，进化不能使生物脱离原有的生物模式。