❶ 酶切的时间长一点对基因是否有影响吗
采用规PCR扩增目基
PCR技术基本原理：该技术模板DNA、引物四种脱氧核糖核苷酸存,依赖于DNA聚合酶酶促合反应.DNA聚合酶单链DNA模板,借助段双链DNA启合,通或两工合寡核苷酸引物与单链DNA模板段互补序列结合,形部双链.适宜温度环境,DNA聚合酶脱氧单核苷酸加引物3′-OH末端,并起始点,沿模板5′→3′向延伸,合条新DNA互补链.
❷ 双酶 基因多少时间37度，或者说酶切时间过长还能用吗，比如转化什么的
看你DNA量多少，酶量多少，DNA是否干净。一般算好量，尽量把酶切时间控制在1-4小时之内，时间过长容易出现星号活性，或者连接效率降低等。
❸ 质粒和基因连接时间过长会怎么样我都连了三天了~~
可能自连的情况概率有点高的，你的载体有筛选标记么，有的话，照样做转化，然后要记得pcr检测或酶切检测阳性克隆。
如果你是放4℃冰箱放了三天，关系应该不大；TA克隆的话，说不定效果更好。
❹ 限制酶酶切过久会咋样
会出现非特异性剪切，跑胶的话会出现弥散或者是大于两条的条带，非特异性程度和内切酶的活性正相关。
❺ 酶切后加热灭活时间长了会怎么样70度30分
没有太大影响
EP管的盖子盖紧封严，经常会出现水分丢失严重的问题，尤其是在小体系酶切后金属浴灭活时，灭活后发现EP管里干了，如果是水分蒸发后凝结在管壁上倒好说，轻甩下就哦了
❻ 在整个酶切反应过程中应注意哪些问题
1) 成功酶切的关键是准备好模板DNA。DNA样品中不能含有有机溶剂（会使酶变性或产生星号 货性），不能含有干扰酶活性的污染物质，不能含有高浓度的EDTA (TE中的EDTA浓度较低，对Mg的浓度影响较小)；同时要对DNA甲基化程度及其对酶切效率的影响要做到心中有数。
2) 选用合适的酶。根据酶切序列选用，特别注意选用甲基化对酶活性的干扰。
3) 正确使用和保存酶。酶需要保存在-20度的低温环境中，只是在需要用酶才从冰箱中取出来。 运输和临时存放时需要将酶至于冰上。手拿酶管时不要接触酶管下步含酶的部分，移酶时尽可能用长TIP, 避免污染。用完后需要及时送回原处。注意：酶通常是最后加。所有
4) 反应体积需要根据实验目的定，常规的酶切一般要维持在10-50ul，酶切鉴定 10-20ul就可以了。
5) 模板浓度问题：浓度过高，溶液黏度过大，酶不能有效扩散，酶切效果不会好。浓度过低，也会 影响酶活性。
6)注意模板用量和反应体积的关系。对酶用量，模板用量，反应体积等要素的确定需要的是时间和 经验的积累。
7) 酶切反应的各个组分加完后，需要用TIP小心混匀几次，short spin 一下就可以保温了。一般不能使用振荡器混匀。
8) 反应温度的选择。一般反应都用37度，但是 Sma I 的最适合温度是25度，37度时酶仍表现出活性，但是效率下降50%。部分从耐热菌制备的酶需要在37度以上的温度反应，如Taq I的最适温度为65度，37度保温，效率仅为前者的1/10。
9) 反应时间的选择。一般酶切鉴定30分钟就可以了。要完全酶切可以采用少量的酶长时间反应， 或较高的酶量短时间处理都可以达到。在使用高酶量的时候需要注意甘油的最终浓度不要超过5%，也就是说10ul的体系，酶的用量不要超过1ul。
10) 是否和如何终止反应？酶切鉴定之类的实验不需要特殊处理。灭活的手段：加入高浓度的 EDTA；65度或80度热处理20-30分钟；部分从高温菌纯化出来的内切酶由于最适的反应温度比较高，热处 理灭活不一定完全，需要用苯酚/氯仿/乙醇方法纯化；电泳回收也是实验室常用除酶的手段。
❼ 请问酶切时间过长是不是会导致DNA降解
通常,overdigest will cause smear, but it cannot cause DNA disappear. The possibility of enzyme contamination is not very high.jinquan82(站内联系TA)我在酶切质粒的时候也遇到过几次这种情况，最后重提的质粒酶切就出来了，初步分析是提取质粒过程中引入DNA酶，使质粒降解guodongsheng200(站内联系TA)可能降解,我也遇到过:P:P:P:P:P:P:P:Pejacky(站内联系TA)可能是你的内切酶引入了外切酶，污染了
❽ 为什么酶切时间过长会造成星号活力
星号活力：指某些限制性内切酶在特定条件下，如PH高，反应液离子浓度过低时，会使酶的特异性发生改变，导致酶的切割位点专一性发生变化并产生许多不需要的序列。
这个是星号活性的定义，看论坛有人用商品酶单酶切酶切过夜后，会得到多条条带，应该就是酶自身乱切了。酶切是需要Mg2+和APT的，时间过长的酶切应该是Mg2+浓度降低导致的酶的特异性发生变化，而导致条带不正常吧。
纯属个人观点，我从网络上也没找到答案。
❾ 20微升体系做酶切时，如果酶量过多会对结果造成什么影响
通常酶保存在50%甘油里面，如果加入酶量过多，会抑制酶的活性，通常加入酶量小于整个体系的...10%
❿ 单酶切时间长有坏处吗
如果酶没有星活性的话，单切时间长一些没什么问题。但是如果该酶有星活性的话，一定不能切的时间过长。